结核分枝杆菌H37RaΔcfp10基因敲除菌株构建及其在毒力与免疫应答中的作用研究
樊超
薛玉芹
黄韵
金英
郑怡菁
石毅
上海交通大学医学院附属仁济医院浦南分院检验科,上海 200125
摘要：目的 探究结核分枝杆菌早期分泌抗原6分泌系统(ESX-1)核心效应蛋白培养滤液蛋白10(CFP-10)的功能,构建其基因敲除菌株,系统分析cfp10基因对H37Ra 菌株毒力调控及宿主免疫应答的影响和机制.方法 根据GenBank中cfp10基因序列设计引物,以H37Ra基因组DNA为模板,采用噬菌体转导基因敲除技术构建H37RaΔcfp10敲除株.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ESX-1相关基因及毒力相关基因表达;采用THP-1巨噬细胞感染实验检测菌株胞内存活数、细胞存活率、炎症因子分泌及自噬、凋亡相关蛋白表达;采用C57BL/6小鼠气雾感染实验检测感染8周后小鼠脏器载菌量.结果 成功构建遗传稳定的H37RaΔcfp10 敲除株.qRT-PCR检测显示,H37RaΔcfp10敲除株中ESX-1相关基因(ESAT-6、cfp10、eccA1、eccB1、eccC1)及毒力相关基因(fadD26、pks1、embA、embB)表达显著低于野生型H37Ra(P<0.05).巨噬细胞感染实验中,与野生型H37Ra组比较,H37RaΔcfp10敲除组感染后6 h、24 h、48 h、72 h在巨噬细胞内存活菌数均显著降低(P<0.05);感染72 h时巨噬细胞存活率显著升高(P<0.05),肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平显著降低(P<0.05),自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.05),凋亡相关蛋白剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平显著降低(P<0.05),抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤2表达水平显著升高(P<0.05).H37RaΔcfp10敲除菌株感染组小鼠肺、脾、肝组织菌落数显著低于野生型H37Ra感染组(P<0.05).结论 cfp10基因是调控H37Ra菌株毒力及ESX-1功能的关键因子,其缺失可通过下调相关基因表达、增强宿主细胞自噬、抑制凋亡等途径减弱毒力.
关键词：结核分枝杆菌H37Racfp10基因同源重组基因敲除毒力验证
资助基金：上海市浦东新区卫生系统重要薄弱学科项目(PWZbr2022-19)上海市浦东新区浦南医院院级课题面上项目(PN2021A14)
论文发表日期：2025-12-20
在线出版日期：2025-12-25（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 122-128 )
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