Toll样受体2基因小干扰RNA对高氧所致氧化应激状态下肺泡上皮细胞功能的影响
黄栋1
方芳2
许峰2
1.贵州省人民医院儿科, 贵阳,5500022.重庆医科大学附属儿童医院重症监护病房
摘要：目的 探讨Toll样受体2(TLR2)基因小干扰RNA(siRNA)对体外高氧暴露条件下A549细胞TLR2基因、蛋白表达及其下游信号通路功能的影响.方法 肺泡上皮细胞株A549置于6孔培养板培养,完全随机分为4组:N组(正常培养组)、H组(高氧组)、T组(高氧+ TLR2-siRNA转染组,转染化学合成TLR2-siRNA)和C组(高氧+阴性对照siRNA转染组,转染化学合成含对照序列的阴性对照-siRNA).运用脂质体转染技术介导化学合成siRNA转染,其中H组、T组和C组细胞高氧培养6h后,流式细胞术检测转染后A549细胞5-羧基荧光素双醋酸盐的表达率,实时定量荧光聚合酶链反应方法检测各组A549细胞TLR2mRNA的表达水平,流式细胞术方法检测各组A549细胞TLR2蛋白表达变化,凝胶电泳迁移率实验检测各组细胞核因子κB核转录水平,酶联免疫吸附测定方法检测各组上清液中白细胞介素6(IL-6)和IL-8含量.结果 转染后A549细胞5-羧基荧光素双醋酸盐的表达率为(92.3±9.6)％;经高氧处理后,H组和C组的TLR2 mRNA、TLR2蛋白水平、核因子κB核转录水平较N组均明显上调[(1.68 ±0.02)、(1.52±0.06)比(1.26±0.02),(9.1±0.8)、(7.8±1.4)比(5.9±2.8),(484 ±64)、(378 ±38)比(46±3)](P＜0.05),各组上清液IL-6、IL-8含量较N组也明显升高(P＜0.05);而T组TLR2mRNA表达(0.87 ±0.06)、TLR2蛋白表达(2.8±0.4)、核因子κB核转录水平(228±29)和上清液IL-6、IL-8含量较H组和C组均明显下调[IL-6:(48.5±6.3) ng/L比(66.7±7.8)、(59.6±6.5) ng/L,IL-8:(125±19) ng/L比(773 ±96)、(971±149) ng/L](均P＜0.05);T组与N组相比,各项检测指标表达差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 针对TLR2mRNA的小干扰RNA可以部分抑制高氧诱导的A549细胞的炎症反应,但是并不能完全阻断核因子κB-炎症因子信号通路.
关键词：小干扰RNA高氧Toll样受体2肺泡上皮细胞
分类号：R392(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30670931)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2026-09-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 23-27 )
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