不同体外培养条件对缺氧诱导原代心肌成纤维细胞活化的影响
付可威
曹梦菲
罗洁
袁伟
212001 镇江,江苏大学附属医院心血管内科
摘要：目的 探讨不同浓度葡萄糖、血清体外培养对缺氧诱导的原代心肌成纤维细胞活化及Yes相关蛋白(Yes-as-sociated protein,YAP)表达的影响.方法 采用酶消及差速贴壁法分离并纯化原代乳小鼠细胞,随机分为6组:低糖高血清组(1.0 g/L葡萄糖+10％血清),高糖高血清组(4.5 g/L葡萄糖+10％血清),低糖中血清组(1.0 g/L葡萄糖+5％血清),高糖中血清组(4.5 g/L葡萄糖+5％血清),低糖无血清组(1.0 g/L葡萄糖+0％血清),高糖无血清组(4.5 g/L葡萄糖+0％血清).体外培养24 h观察细胞形态,Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子(transforming growth factor beta,TGF-β)、Ⅰ 型胶原及 YAP 表达,免疫荧光法观察α-SMA、YAP表达及定位,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷染色以及划痕实验分别评估细胞增殖、迁移能力.结果 经1％O2培养24 h后,随着培养液血清水平下降及葡萄糖浓度升高,细胞形态逐渐向肌成纤维细胞变化,以高糖无血清组细胞形态变化最为显著.与高糖高血清组比较,高糖无血清组Ⅰ型胶原、TGF-β、α-SMA及YAP表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与低糖高血清组比较,低糖无血清组α-SMA荧光强度明显升高[(9.23±2.45)％vs(2.40±2.04)％,P＜0.05];与低糖无血清组比较,高糖无血清组Ⅰ型胶原、TGF-β、α-SMA及YAP表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与高糖高血清组和低糖无血清组比较,高糖无血清组α-SMA荧光强度、YAP入核、细胞迁移明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在1％O2缺氧条件下,选用高糖无血清培养对于构建缺氧诱导活化的体外细胞模型最为合适,并且YAP激活程度最为显著.
关键词：缺氧成纤维细胞体外培养技术Yes相关蛋白
资助基金：江苏省重点研发计划项目(BE2021694)
论文发表日期：2025-04-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 497-503 )
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