基于磷脂酰肌醇3激酶与苏氨酸蛋白激酶1信号通路小檗碱调节巨噬细胞极化机制研究
陈玉善
王婷婷
孟中华
尚莎莎
郑峻萌
宗永华
司春婴
梁亚州
关怀敏
450000 郑州,河南中医药大学第一附属医院心脏中心
摘要：目的 探究小檗碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人髓系白血病单核细胞(THP-1)巨噬细胞极化的影响和可能作用机制.方法 采用佛波酯(PMA)将THP-1细胞诱导成巨噬细胞,加入不同浓度的小檗碱,分别为对照组、小檗碱5 μmol/L组、小檗碱10 μmol/L组、小檗碱20 μmol/L组、小檗碱40 μmol/L组、小檗碱50 μmol/L组,干预24 h或48 h.采用细胞计数8试剂盒检测细胞活力,筛选小檗碱最佳浓度和时间.将PMA诱导的THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、小檗碱组、抑制剂组、小檗碱+抑制剂组.酶联免疫吸附测定检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)mRNA表达情况;Western blot检测Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)抗体蛋白含量.结果 干预24 h时,与对照组比较,小檗碱40 μmol/L组和50 μmol/L组巨噬细胞活性降低(P＜0.05);干预48 h时,小檗碱5 μmol/L 组、小檗碱10 μmol/L组、小檗碱20 μmol/L 组、小檗碱40μmol/L 组、小檗碱 50 μmol/L 组巨噬细胞活性均低于对照组[(0.89±0.02)％、(0.82±0.03)％、(0.71±0.02)％、(0.62±0.03)％、(0.53±0.02)％vs(1.01±0.01)％,P＜0.05].小檗碱 20 μmol/L 组处理 24 h 时对细胞活力影响不大,作为最佳浓度和时间.与空白组比较,模型组iNOS含量和TNF-α mRNA水平升高,TGF-β1含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P＜0.05);与模型组比较,小檗碱组iNOS含量和 TNF-α mRNA 水平降低,TGF-β1 含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA 及 p-Akt1/Akt1 蛋白表达水平升高(P＜0.05);与小檗碱组比较,小檗碱+抑制剂组iNOS含量和TNF-α mRNA水平升高,Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 小檗碱可通过激活PI3K/Akt1通路,抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应,并抑制巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化.
关键词：小檗碱脂蛋白类LDL巨噬细胞磷酸肌醇3-激酶类PI3K/Akt1信号通路
资助基金：国家重点研发计划(2020YFC2004706)国家自然科学基金(82004311)河南省中医药科学研究专项课题(2019JDZX2044)河南省中医药科学研究专项课题(2022JDZX026)河南省卫生健康委国家中医药传承创新专项课题(2023ZXZX1001)河南省中医药科学研究专项课题(2024ZY2026)
论文发表日期：2024-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 694-698 )
英文信息