凋亡相关斑点样蛋白不同表位抗体对β淀粉样蛋白聚集及神经毒性作用的研究
赖霞1
刘河2
朱晓鹏2
龙艳2
邓娟2
1.400042 重庆,陆军军医大学大坪医院健康管理中心;重庆市急救医疗中心老年病科工作2.400042 重庆,陆军军医大学大坪医院健康管理中心
摘要：目的 探讨凋亡相关斑点样蛋白(ASC)不同表位抗体对β淀粉样蛋白(Aβ)聚集和神经毒性的作用.方法 SH-SY5Y-APP695细胞培养体系培育按实验目的分组:A组(25 µmol/L Aβ)、B组(2 μmol/L ASC)、C组(2 μmol/L ASC+25 µmol/L Aβ+10 μg/ml AL177)、D 组(2 μmol/L ASC+25 μmo/L Aβ+10 μg/ml ab155970)、E 组(25μmol/L Aβ+2 μmol/L ASC)用于探讨重组ASC蛋白与Aβ蛋白结合.对照组[磷酸盐吐温缓冲液(PBST)]、Aβ组(10 µmol/L Aβ)、Aβ+N 端组(10 µmol/L Aβ+10 μg/ml AL177)、Aβ+C 端组(10 µmo/L Aβ+10 μg/ml ab155970)用于探讨细胞炎性反应.Ⅰ 组(PBST)、Ⅱ 组(10 μmol/L Aβ)、Ⅲ 组(10 μmol/L Aβ+10 μg/ml AL177)、Ⅳ组(10 μmol/L Aβ+10 μg/ml ab155970)用于细胞毒性检测.N 端组[10 μg/ml AL177+10 μg/ml 异硫氰酸荧光素(FITC)-Aβ42]、C 端组(10 μg/ml ab155970+10 μg/ml FITC-Aβ42)、空白组(PBST)用于免疫荧光染色.结果 与A组比较,C组细胞中Aβ聚集减少,D组Aβ聚集增多(P＜0.01).与对照组比较,Aβ+C端组Aβ引起的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1含量明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).噻唑蓝法检测结果显示,Ⅱ组细胞活性低于Ⅰ组,差异有统计学意义(1.12±4.25 vs 0.73±5.68,P＜0.01);Ⅲ组细胞活性明显高于Ⅱ组,差异有统计学意义(1.28±2.21 vs 0.73±5.68,P＜0.05).结论 ASC蛋白N端抗体AL177抑制Aβ聚集,ASC蛋白C端抗体ab155970促进Aβ聚集,并具有时间依赖性.C端抗体刺激Aβ引起炎性反应,N端抗体拮抗对Aβ神经细胞毒性.表明ASC不同表位抗体对Aβ聚集及神经毒性具有不同作用,对阿尔茨海默病防治有一定的应用前景.
关键词：β淀粉样蛋白阿尔茨海默病细胞毒性免疫抗体表位凋亡相关斑点样蛋白
资助基金：国家自然科学基金(82071435)
论文发表日期：2024-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 341-343 )