大鼠微小RNA-22腺病毒载体的构建和鉴定
范致星
杨简
杨俊
丁家望
彭家芹
杨超君
1.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,4430032.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,4430033.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,4430034.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,4430035.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,4430036.三峡大学心血管病研究所 三峡大学第一临床医学院心内科, 宜昌,443003
摘要：目的：构建并鉴定大鼠miR-22腺病毒载体，制备具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期研究miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制奠定基础。方法化学合成目的基因序列（含酶切位点），对目的基因进行PCR扩增、酶切，酶切后的目的基因与酶切后的GV202载体连接产生miR-22腺病毒表达载体，将连接好的产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞获得大量阳性克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定及测序鉴定。利用脂质体2000试剂，让成功构建的miR-22重组腺病毒载体和腺病毒包装质粒共转染人胚肾293细胞，得到重组腺病毒，完成重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定。结果成功构建了大鼠miR-22腺病毒载体。经重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定，最终获得的重组腺病毒滴度为1×109 PFU/ml。结论成功构建制备获得了具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期顺利开展有关miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制研究提供了可能。
关键词：腺病毒科微RNAs心肌再灌注损伤质粒转染脂质体
资助基金：国家自然科学基金(81200088)宜昌市科学技术研究与开发项目(A12301－01)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 853-855 )
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