人正常垂体组织全长cDNA文库的构建及初步鉴定
蔡英
黄慧玲
1.天津市神经外科研究所,天津市环湖医院,3000602.天津市神经外科研究所,天津市环湖医院,300060
摘要：目的 应用SMART技术构建人正常垂体组织的全长cDNA文库.方法 用TRlzol试剂提取组织总RNA,利用逆转录酶的末端转移酶活性,预先加入SMART引物,在CDS Ⅲ/3'PCR引物的引导下合成cDNA第一链,LD-PCR扩增得到全长双链cDNA,经SfiI酶切及cDNA分级分离后,克隆入改造的pBluescriptⅡ SK栽体,得到原始文库.将质粒转化入宿主茵DH-5α,以初步鉴定文库的质量.结果 文库的总库容为1×106克隆,重组率93.45%,插入片段平均长度＞1000 bp,cDNA的完整性比率为44.4%.结论 此法构建的人正常垂体组织全长cDNA文库符合建库要求,可作为进一步研究与人垂体疾病相关基因的可靠材料.
关键词：垂体基因文库逆转录聚合酶链反应RNADNA互补
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1129-1132 )
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