D-半乳糖通过p53调节自噬和凋亡损伤小鼠耳蜗毛细胞
阎希芮1
王艺蓉1
楚敏1
刘晴2
施建蓉1
董杨1
1.上海中医药大学中西医结合学院(上海 201203)2.上海中医药大学中医学院
摘要：目的 在耳蜗基底膜离体培养模型上,观察D-半乳糖对小鼠耳蜗基底膜毛细胞的作用,并从自噬和凋亡途径进一步探讨其分子机制.方法 选取SPF级3~4 d龄Wistar大鼠132只(264个耳蜗)体外培养3~4 d龄Wistar大鼠耳蜗基底膜,用100 mmol/L、300 mmol/L、500 mmol/L D-半乳糖处理24 h,将大鼠分为对照组、100 mmol/L D-半乳糖组、300 mmol/L D-半乳糖组 和500 mmol/L D-半乳糖组,每组24只(48个耳蜗).P53抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)实验分为对照组、300 mmol/L D-半乳糖组、50 μmol/L PFT-α组、300 mmol/L D-半乳糖+50 μmol/L PFT-α组,每组9只(18个耳蜗).采用Alexa Fluo 555-鬼笔环肽标记,进行全耳蜗毛细胞计数和定量分析.Western blot分析耳蜗基底膜自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1,细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3以及p53蛋白的表达.免疫荧光定位检测耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达变化.用p53抑制剂PFT-α抑制p53蛋白表达,检测下游蛋白LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3表达的变化.结果 D-半乳糖可导致耳蜗基底膜毛细胞损伤和缺失,并随剂量增加而加重.Western blot结果显示,D-半乳糖可增加耳蜗基底膜p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平以及Bax/Bcl-2的比值,降低Beclin-1的表达,且呈一定剂量依赖性.免疫荧光结果显示,D-半乳糖可增强耳蜗基底膜毛细胞上p53、LC3-Ⅱ、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达.P53抑制剂PFT-α可以抑制D-半乳糖引起的p53、p62和Cleaved Caspase-3蛋白表达的增高,但可以进一步升高LC3-Ⅱ蛋白表达.结论 D-半乳糖可通过p53调节自噬和凋亡诱导体外培养的耳蜗基底膜毛细胞损伤.
关键词：老年性聋D-半乳糖自噬凋亡p53
资助基金：国家自然科学基金(81774020)上海中医药大学预算内项目(2021LK030)上海市卫健委上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划项目(ZY(2021-2023)-0208)
论文发表日期：2025-02-27
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 101-107 )
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