过表达mitf基因腺相关病毒的构建与鉴定
史珣贝1
林昶1
杨仕明2
吴南2
1.福建医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,福建省耳鼻咽喉研究所 福州,3500052.解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科，解放军耳鼻咽喉研究所，聋病教育部重点实验室 北京100853
摘要：目的：获得能够过表达小眼畸形相关转录因子(mitf）的重组腺相关病毒载体，用于mitf基因突变相关疾病的基因治疗。方法利用PCR扩增获得目的基因，构建携带目的基因mitf的重组腺相关病毒载体，利用人工脂质体法将pAAV-RC，pHelper ,以及pAAV-GFP系列载体转染到HEK293细胞中，采用细胞内质粒DNA同源重组法进行重组腺相关病毒载体构建，利用柱纯化法纯化病毒载体，qPCR法测定重组腺相关病毒载体滴度，病毒载体感染HEK293细胞进行病毒有效性及安全性鉴定，real-time PCR与western blot法进行mitf表达的鉴定。结果 PCR扩增和测序结果一致证实成功获得目的基因并且成功构建mitf基因腺相关病毒载体，测得高水平病毒滴度1.0*10^12vg/ml，病毒载体感染HEK293细胞转染效率为86.3%，并未发现HEK293细胞死亡，Real-time PCR及Western blot检测构建Mitf基因转录mRNA与表达的蛋白与正常MITF一致。结论成功构建的携带mitf基因的重组腺相关病毒载体为未来进行mitf突变导致的遗传性疾病的基因治疗提供新思路。
关键词：MITF腺相关病毒基因治疗
分类号：R764(耳科学、耳疾病)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 841-845 )
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