应用酶消化耳蜗基底膜上皮细胞的研究
米文娟
宋勇莉
田克勇
陈福权
查定军
邱建华
1.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安7100322.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安7100323.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安7100324.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安7100325.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安7100326.第四军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 西安710032
摘要：目的：比较联合应用嗜热菌蛋白酶和I型胶原酶消化对耳蜗基底膜上皮细胞的分离效果。方法分离P0-3天SD大鼠基底膜，并将其分为四组，分别为：A组胰酶消化组；B组嗜热菌蛋白酶消化组；C组I型胶原酶消化组；D组嗜热菌蛋白酶和I型胶原酶消化组。收集各组消化的细胞进行悬浮培养和诱导分化，分别计数各组形成的细胞球数目，应用免疫荧光对获得的细胞来源进行鉴定，并比较各组Cytokeratin-18阳性细胞的百分率。结果从4种方法分离得到的细胞经培养后均可形成细胞球，表达干细胞标记物Nestin和细胞分裂标记物BrdU。获得细胞大部分均表达上皮来标记物E-cadherin和cytokeratin-18，而不表达间质细胞标志物Vimentin，经过诱导分化后可以分化成毛细胞样细胞。应用嗜热菌蛋白酶和I型胶原酶消化获得的细胞球数目显著高于其它组(P<0.05)；而采用胰酶消化获得的细胞cytokeratin-18阳性率显著低于其它组(P<0.05)。结论联合应用嗜热菌蛋白酶和I型胶原酶消化耳蜗基底膜上皮细胞可以显著提高基底膜上皮细胞的分离效果，从而耳蜗前体细胞的研究提供有力研究基础。
关键词：毛细胞前体细胞细胞培养上皮细胞酶消化
分类号：R764(耳科学、耳疾病)
资助基金：国家自然科学基金海外重大合作项目(81120108008)国家自然科学基金(81271069)Acknowledgements This study was supported by the National Natural Science Foundation of China(grant no.81271069)the National Natural Science Foundation of Major Projects Overseas of China(Grant no.81120108008)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 255-259 )
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