MITF基因重组真核细胞表达质粒的构建、表达及意义
张华1
冯娟1
李家大2
罗浑金2
陈红胜3
梅凌云3
贺楚峰3
冯永3
1.新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 乌鲁木齐 8300112.中南大学医学遗传学国家重点实验室 长沙 4100083.中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科 长沙 410087
摘要：目的：通过构建基因MITF及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waardenburg综合征（Waardenburg syndrome，WS）发病机制提供一定的实验依据和基础。方法通过分子克隆技术双酶切pCMV-MITF和pCMV-Flag后连接构建MITF基因重组真核细胞表达质粒pCMV-MITF-Flag，以其为模板分别构建MITF基因新发突变R217I和T192fs表达质粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fs-Flag，DNA测序鉴定。MITF、R217I和T192fs表达质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞或黑色素瘤UACC903细胞，Western blot和细胞免疫荧光分别检测和观察野生MITF蛋白和突变R217I、T192fs蛋白的表达和分布。结果MITF及其突变体R217I和T192fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在黑色素瘤UACC903细胞中正确表达，MITF和R217I仅在细胞核中分布，而T192fs仅在细胞质分布。结论成功构建了MITF基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对MITF蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究国人MITF基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。
关键词：Waardengurg综合征MITF基因突变分子克隆技术体外实验
分类号：R394.112(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(81260160)国家自然科学基金(81170923)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 136-141 )
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