C57BL/6J小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记观察及其意义
施磊1
赵宁1
陈丽平1
商秀丽1
徐义策2
王雪峰2
柳柯3
1.中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,沈阳,1100012.辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,锦州,1210013.中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科,沈阳,110001;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军总医院耳鼻咽喉研究所,北京,100853
摘要：目的 探讨小鼠耳蜗内毛细胞传人神经突触的免疫学标记特点及其应用方法.方法 在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1:200),GluR2/3(glutamate receptor 2/3,AMPA receptor subunit 2/3,谷氨酸受体亚单位2/3;1:200)和Dapi(4',6-Diamidino-2-phenylindole,4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色剂对内毛细胞突触的前膜特异结构RIBEYE、突触后膜的谷氨酸受体以及细胞核进行单独、双重和三重免疫标记,并利用激光共聚焦显微镜能够连续扫描和叠加图像的特性,观察耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内、外毛细胞之间的位置关系.结果 单独应用Ctbp2可以清晰显示内毛细胞突触前膜所标记的结构,结合使用抗体GluR2/3进行免疫双标则可以完整显示内毛细胞突触前后膜的相关蛋白,而结合应用Dapi细胞核染色的方法 可以明确标记其存在的位置以及和内、外毛细胞之间的关系,如果在此基础上加上激光共聚焦显微镜下的平光图像,则会使标记结果 更加清晰、客观和准确.结论 本方法 可以准确显示耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内外毛细胞之间的位置关系,如果在实验中合理应用多重免疫荧光标记方法,将会对不同生理和病理条件下深入研究耳蜗内毛细胞突触的可塑性及其在听力变化中的作用具有重要的价值.
关键词：内毛细胞传入神经突触RIBEYE/Ctbp2免疫标记激光共聚焦显微镜
分类号：R322.923(人体形态学)R338.13(人体生理学)
资助基金：国家自然科学基金(31040038)中国博士后科学基金(20100470103,201003779)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 456-460 )
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