电针预处理通过MG53抑制RIPK1/RIPK3/MLKL坏死性凋亡通路减轻心肌缺血再灌注损伤机制的研究

唐玥; 陈安坤; 刘欣; 娄雅婷; 郁洁; 张程程

摘要：目的探究电针预处理对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的影响与相关机制.方法 C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组 5 只;MG53 基因敲除(MG53-/-)小鼠随机分为MG53-/-模型组和MG53-/-电针组,每组 5 只.电针组和MG53-/-电针组在造模前连续 7d进行"内关"穴电针预处理,其余组麻醉后陪同仰卧固定.第8 天建立MIRI模型,结扎小鼠左冠状动脉前降支 30 min,再灌注24h后取材.Western blot检测肌细胞膜修复蛋白(MG)53、受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、RIPK3、磷酸化(p)-RIPK、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)蛋白表达,RT-qPCR检测 RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA表达;ELISA检测心肌组织三磷酸腺苷(ATP)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-18 水平;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;心脏超声评估左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS);TTC染色评估心肌梗死面积;电镜观察线粒体超微结构;HE染色观察心肌组织病理形态变化.结果在本研究中,电针预处理通过多种机制有效缓解了MIRI.与模型组比较,电针预处理显著改善了心脏功能,提高了LVEF和LVFS水平(P<0.01),增加了心肌组织线粒体ATP 含量(P<0.05);降低了CK-MB、LDH和cTnT水平(P<0.01),降低了心肌细胞凋亡率(P<0.01)和caspase-1表达(P<0.01),缩小了心肌梗死面积(P<0.01),减轻了心肌组织病理损伤,保护了线粒体结构,并抑制了炎症因子和氧化应激(P<0.05).此外,电针预处理能够促进心肌和血清中MG53 蛋白的表达(P<0.01),并抑制p-RIPK蛋白与RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白及mRNA的表达(P<0.05).与模型组比较,MG53-/-模型组的心肌梗死面积增大(P<0.01),心肌损伤标志物CK-MB、LDH、cTnT水平升高(P<0.01),p-RIPK蛋白表达增加,RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白及mRNA的表达增加(P<0.05).结论电针内关预处理可以有效缓解MIRI、保护心肌组织、改善心功能,其机制可能与电针通过MG53 蛋白影响RIPK1/RIPK3/MLKL坏死性凋亡信号通路有关.