硝普钠诱导软骨细胞凋亡调控骨髓间充质干细胞成骨分化的作用
牟哲飞
陈嘉如
陈芒芒
吕杨训
倪跃平
叶秀云
温州市中心医院骨科,温州 325000
摘要：目的 探究硝普钠诱导软骨细胞凋亡对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响,以及巨噬细胞清道夫受体1/磷酸化磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B通路在此过程中的调控作用.方法 分离培养原代小鼠软骨细胞和小鼠骨髓间充质干细胞.应用硝普钠构建软骨细胞凋亡模型,同时使用凋亡软骨细胞的上清和地塞米松、维生素C磷酸酯和β-甘油磷酸钠处理骨髓间充质干细胞,探究骨髓间充质干细胞的成骨分化能力的影响.应用细胞计数试剂盒-8法检测软骨细胞的细胞活力,应用蛋白质印迹、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测软骨细胞凋亡相关指标B淋巴细胞瘤-2蛋白、Bcl-2相关蛋白X、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达情况.以及BMSC细胞成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素和巨噬细胞清道夫受体1/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B、通路关键基因巨噬细胞清道夫受体1、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶、磷酸化蛋白激酶B的表达和磷酸化情况.应用茜素红染色观察BMSC细胞的成骨份化情况.结果 1.0 mmol·L-1 的硝普钠可以抑制软骨细胞的细胞活力[1.0 mmol·L-1:(81.13±3.79)vs control:(100.00±7.97)],同时上调Bcl-2相关蛋白X和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在mRNA和蛋白水平的表达,抑制Bcl-2在mRNA[Bcl-2相关蛋白X:1.0 mmol·L-1:(3.19±0.20)vs control:(1.00±0.05);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3:1.0 mmol·L-1:(4.00±0.20)vs control:(1.00±0.12);Bcl-2:1.0 mmol·L-1:(0.51±0.11)vs control:(1.00±0.10)]和蛋白水平[Bcl-2相关蛋白X:1.0 mmol·L-1:(1.82±0.16)vs control:(1.00±0.09);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3:1.0 mmol·L-1:(1.95±0.12)vs control:(1.00±0.06);Bcl-2:1.0 mmol·L-1:(0.64±0.04)vs control:(1.00±0.07)]的表达(t=3.700、26.021、31.401、9.886、10.941、17.345、10.938,P<0.05).凋亡软骨细胞的上清可以促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,上调成骨相关基因碱性磷酸酶[成骨诱导+上清:(3.02±0.14)vs control:(1.00±0.08)]、骨桥蛋白[成骨诱导+上清:(2.92±0.28)vs control:(1.00±0.11)]、骨钙素[成骨诱导+上清:(3.32±0.33)vs control:(1.00±0.10)]的表达,增加茜素红染色的阳性率(t=21.698、11.054、11.654,P<0.05).机制研究发现,凋亡软骨细胞上清促进骨髓间充质干细胞成骨分化与MSR1/PI3K/Akt通路的激活有关.结论 硝普钠诱导的凋亡软骨细胞对骨髓间充质干细胞成骨分化具有促进作用,并可以激活BMSC成骨分化过程中的MSR1/PI3K/Akt通路.
关键词：硝普钠软骨细胞间充质干细胞成骨分化凋亡
资助基金：温州市科研项目(Y2023481)
论文发表日期：2025-06-25
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 571-576 )
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