增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶共表达质粒载体构建及在肝癌细胞株HepG2表达的研究
唐勇
刘作金
周世骥
蒋金伟
刘长安
1.重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,4000102.重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,4000103.重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,4000104.重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,4000105.重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆,400010
摘要：目的 构建增强型绿色荧光蛋白与单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的真核共表达质粒载体pIRES2-EGFP-TK,并鉴定其在肝癌细胞株HepG2中转染和表达.为肝癌靶向基因治疗提供实验依据.方法 2008年6月重庆医科大学附属第二医院从含有目的 基因的质粒PORE-HSV1-TK中获得HSV1-TK基因片段,连接到增强型绿色荧光蛋白共表达载体pIRES2-EGFP,得到重组质粒pIRES2-EGFP-TK并进行鉴定、测序.将重组质粒用脂质体法转染肝癌细胞株HepG2,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)在细胞内的表达,逆转录聚合酶链反应RT-PCR检测胸苷激酶TK的mRNA表达水平,免疫印迹Western blotting法检测TK蛋白表达情况,新霉素类似物G418筛选出阳性克隆.结果重组克隆载体内的TK序列与GeneBank报告的序列完全一致.肿瘤细胞转染后在荧光显微镜下可观察到有绿色荧光出现,G418筛选的最佳浓度为600mg/L,TK的mRNA表达水平高,TK蛋白有明显表达.结论 实验成功构建EGFP和TK真核共表达载体,在肝癌细胞能有效的表达.
关键词：肝癌绿色荧光共表达载体HepG2肝癌细胞单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶
分类号：R6(外科学)
资助基金：国家自然科学基金(30872977)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 937-940 )
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