DOI: 10.12307/2025.279
FTA-环介导等温扩增技术直接提取变异链球菌DNA的效果评价
王玥晖1
尚进1
杨晨1
符冬格1
曹灿1
张晓东1
王敬夫2
1.北部战区总医院口腔科,辽宁省 沈阳市 1100162.北部战区总医院口腔科,辽宁省 沈阳市 110016;空军军医大学第三附属医院颌面外科,陕西省 西安市 710004
摘要：背景:变异链球菌是龋病的重要病原菌,及时检测变异链球菌水平对龋病的早发现、早治疗有重要意义.
目的:建立并评价FTA-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术直接提取变异链球菌DNA的应用效果.
方法:①制备含有ATCC标准菌株变异链球菌的菌悬液,接种于脑心浸出液培养基,充分混匀后按10倍梯度稀释成7种浓度(4.2×107,4.2×106,4.2×105,4.2×104,4.2×103,4.2×102,4.2×10 CFU/mL),每个稀释级做2个平行对照,并增加无菌水作为空白对照;②分别采用FTA卡、常规煮沸法、试剂盒提取及裂解液提取4种方法直接提取菌株DNA,通过LAMP技术进行扩增,并进行特异性试验,比较4种提取方法的差异.
结果与结论:①4种方法提取的DNA均满足LAMP扩增的要求;②特异性试验结果显示,只有变异链球菌才可特异扩增出靶基因;③裂解液提取法最低检测限为4.2×103 CFU/mL,FTA卡提取法最低检测限为4.2×104 CFU/mL,试剂盒提取法和常规煮沸法最低检测限分别为4.2×106 CFU/mL和4.2×107 CFU/mL;④4种提取方法其他方面的比较显示,试剂盒提取法的实验成本、步骤数和时间都是最高;其他3种方法步骤数一致,其中FTA卡所需仪器设备最少,常规煮沸法单次成本最低,裂解液提取法所需时间最少;FTA卡和裂解液提取法仅需少量菌即可提取成功,后者在时间方面优于FTA卡,但相较于FTA卡其单次成本高,所需设备多;⑤结果说明,该研究建立的FTA-LAMP技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、结果可视化等优势,有望为高效提取检测变异链球菌提供新途径.
关键词：变异链球菌环介导等温扩增FTA卡DNA可视化
分类号：R496(康复医学)R318(医用一般科学)R782(口腔颌面部外科学)
论文发表日期：2025-02-11
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1043-1049 )
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