川楝子醇提物通过线粒体途径诱导白血病CEM细胞的凋亡

吴慧婷; 朱大诚; 徐笑明; 常娜

摘要：背景:苦寒中药川楝子具有小毒,对生长环境要求不高,在实体瘤中能显著抑制肿瘤细胞的增殖,但在血液肿瘤中报道较少,基于前期研究结果,并结合中医"以毒攻毒"理论探讨其主要成分川楝素抗急性淋巴细胞白血病的作用机制.目的:探究川楝子醇提物抑制白血病CEM细胞增殖的作用机制.方法:人急性T淋巴细胞白血病CEM细胞培养至对数生长期,经5种浓度梯度川楝子醇提物作用24,48,72 h后,通过MTT实验求得各组细胞抑制率.考虑到受渗透压影响并保证后续实验的开展,筛选出川楝子醇提物低、中、高质量浓度(16,80,400 mg/L),作用大鼠外周血淋巴细胞24,48,72 h,采用MTT实验和吉姆萨-瑞氏染色探究其毒性作用,通过Hoechst 33258染色观察CEM细胞凋亡小体,RT-qPCR实验检测川楝子醇提物作用CEM细胞24,48 h后p53、Bcl-2、Bax、Cyt-C、Caspase-9和Caspase-3基因转录情况,Western blot实验检测川楝子醇提物作用CEM细胞24,48 h后p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果与结论:①16,80,400 mg/L川楝子醇提物对正常淋巴细胞无明显抑制作用;②16,80,400 mg/L川楝子醇提物作用CEM细胞经Hoechst 33258染色能看到蓝色亮光的凋亡小体;③与对照组比较,80,400 mg/L川楝子醇提物作用CEM细胞后能提高p53、Bax、Cyt-C、Caspase-9和Caspase-3基因转录水平(P<0.05或P<0.01),降低Bcl-2基因转录水平(P<0.05或P<0.01),尤其以48 h较为突出;④给药24 h后,相较于对照组,16,80,400 mg/L川楝子醇提物组Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),400 mg/L川楝子醇提物组p53蛋白表达升高(P<0.05),给药48 h后,相较于对照组,80,400 mg/L川楝子醇提物组p53蛋白表达明显上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),Bax蛋白表达则显著升高(P<0.05或P<0.01);⑤结果表明,川楝子醇提物能显著抑制白血病CEM细胞的增殖,在一定范围内呈现浓度和时间依赖性,其机制可能是通过诱导线粒体介导的细胞凋亡途径来实现的.