沉默DEPTOR表达促进胰岛细胞释放胰岛素
邱鸿
赖舒畅
潘道延
王肖
沈洁
1.南方医科大学第三附属医院,广东省广州市,5106302.南方医科大学第三附属医院,广东省广州市,5106303.南方医科大学第三附属医院,广东省广州市,5106304.南方医科大学第三附属医院,广东省广州市,5106305.南方医科大学第三附属医院,广东省广州市,510630
摘要：背景:mTOR 复合物是调控胰岛 β 细胞质量与功能的关键蛋白,Deptor 是复合物中的共有组分,Deptor的丢失是否会影响胰岛β细胞的胰岛素分泌功能,目前尚缺乏相关研究.目的:利用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞DEPTOR基因的表达,探讨其对胰岛素瘤细胞分泌功能的影响及背后的机制.方法:设计合成3对针对DEPTOR 基因的siRNA序列,利用脂质体法将siRNA转染至NIT-1细胞.实验组设为6组:①空白转染组(NIT-1细胞,转染复合液仅加Lipofectamin);②阴性对照转染组(NC-FAM);③阳性对照转染组(GAPDH);④siRNA deptor 1组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor385);⑤siRNA deptor 2 组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor766);⑥siRNA deptor 3 组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor1275).荧光显微镜下观察转染效率;QPCR检测DEPTOR mRNA的相对表达量;ELISA胰岛素试剂盒检测NIT-1细胞胰岛素分泌情况;Western blot检测DEPTOR下游关键蛋白的表达.结果与结论:①在荧光显微镜下观察,siRNA能有效转入到NIT-1细胞内,呈绿色点状荧光;②PCR检测干扰后DEPTOR mRNA的相对表达量,发现设计合成3对siRNA序列中有两对siRNA序列(siDEPTOR385 and siDEPTOR766)对DEPTOR基因有干扰效果,干扰效果与阴性对照差异有显著性意义(P ＜ 0.05);③ELISA胰岛素测定结果显示,在NIT-1细胞中沉默DEPTOR后,有效转染组细胞的胰岛素分泌显著升高(P ＜ 0.05);④Western-blot检测结果显示,Deptor下游关键蛋白S6、4EBP-1磷酸化明显增加,AKT磷酸化略有减少;⑤结果说明,利用RNAi技术在NIT-1细胞上可以有效地沉默DEPTOR 基因的表达,并促进细胞胰岛素的分泌,该现象可能与mTORC1通路的激活相关.
关键词：DEPTOR胰岛细胞RNA干扰基因沉默胰岛素分泌
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金资助项目(81770878)广州市科技创新委员会重大专项课题(201604020007)the National Natural Science Foundation of China,(No.81770878)the Major Project of Guangzhou Science Technology and Innovation Commission,(No.201604020007)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2577-2582 )
英文信息