β-arrestin 2抗基因RNA对小鼠C17.2神经干细胞μ阿片受体脱敏感化的影响
高峰1
陈莎莎1
刘希江1
徐懋2
杨辉1
田玉科1
1.华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室,湖北省武汉市,4300302.北京大学第三医院麻醉科,北京市,100191
摘要：背景:前期实验中采用新型基因沉默方法--抗基因RNA下调了细胞内β-arrestin 2基因的表达,实现细胞水平的基因敲除效应.目的:在前期实验基础上,观察抗基因RNA下调小鼠C17.2神经干细胞β-arrestin 2基因表达后其对DAMGO诱导μ阿片受体脱敏感化的影响.方法:小鼠C17.2神经干细胞应用含体积分数为10%胎牛血清、10 mg/L青霉素和10 mg/L氨苄青霉素的DMEM培养基,置于37 ℃,体积分数为5% CO_2培养箱进行培养.待细胞长至80%汇合,用0.25%胰蛋白酶消化传代,每五六天传代1次.通过RT-PCR和免疫细胞化学法检测C17.2细胞μ阿片受体的表达.在脂质体介导下,将已被证实具有基因沉默效应的抗基因RNA片段转染C17.2细胞,荧光显微镜下观察转染24 h后绿色荧光蛋白的表达.应用μ阿片受体选择性激动剂DAMGO和[~(35)S]GTPγS结合实验检测C17.2细胞μ阿片受体与G蛋白的耦联能力.结果与结论:RT-PCR结果证实C17.2细胞内有μ阿片受体存在,而免疫细胞化学结果显示μ阿片受体主要在细胞膜和细胞浆中表达.荧光显微镜下观察可见转染质粒pGPU6/GFP/Arrb9的C17.2细胞中有绿色荧光蛋白的表达.[~(35)S]GTPγS结合实验结果显示:未应用DAMGO进行处理的细胞中,[~(35)S]GTPγS结合的刺激比率为(253±17)%;应用DAMGO预先对细胞进行处理后,刺激比率降为(113±14)%(P < 0.05);而转染β-arrestin 2抗基因RNA的细胞在DAMGO刺激下,[~(35)S]GTPγS结合的刺激比率则仍维持在(239±15)%,表明抗基因RNA下调β-arrestin 2的表达,可抑制μ阿片受体脱敏感的产生.
关键词：基因沉默抗基因RNAβ-arrestin2阿片受体神经干细胞
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30700783)高等学校博士学科点专项科研基金(新教师类)(20070487117)贝朗麻醉科学研究基金(2007)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 82-85 )
英文信息