基于食管上皮Trp53敲除和Ccnd1过表达的食管癌自发成瘤小鼠模型的构建
张秀森
张旭东
金星
张石垒
郭笑希
陈世昱
原翔
高社干
河南科技大学临床医学院,河南科技大学第一附属医院,肿瘤医院,省部共建食管癌防治国家重点实验室,河南省微生态与食管癌防治重点实验室,河南省肿瘤表观遗传重点实验室,中国洛阳,471003
摘要：目的 利用Cre-loxP系统和CRISPR/Cas9技术构建Trp53基因敲除和Ccnd1过表达的小鼠食管癌模型.方法 针对C57BL/6小鼠Trp53基因外显子2-9,设计RNA靶位点并在体外转录获得sgRNA,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法获得F0代小鼠,繁育得到Trp53fl/fl小鼠.同时针对C57BL/6小鼠基于 Cre-loxP系统在其安全位点设计鼠Ccnd1基因条件性过表达(Ccnd1R26-LSL-mcherry)小鼠.用Trp53fl/fl小鼠、Ccnd1R26-LSL-mcherry小鼠和带有EDL2-Cre小鼠进行交配繁殖,收集小鼠尾部组织提取DNA,利用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳对其子代进行基因型鉴定,验证基因在小鼠的表达情况,得到目标小鼠,即食管上皮Trp53基因敲除Ccnd1 过表达小 鼠(Trp53fl/fl;Ccnd1R26-LSL-mcherry;EDL2-Cre 小鼠,简写为 Trp53fl/fl;Ccnd1cKI/cKI;EDL2-Cre 鼠),并命名为CP鼠.提取CP小鼠食管组织蛋白,用Western blot检测Trp53蛋白和Ccnd1蛋白的表达水平;记录CP小鼠的体重,并与野生型小鼠比较;取不同生长时期的小鼠,行苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠食管组织的形态结构.结果 根据鼠尾提取的DNA用PCR技术能鉴定出小鼠的基因型,成功繁育出 CP小鼠,该小鼠可正常生长,体质量与野生型小鼠无明显差异(P＞0.05),状态良好,饮食饮水正常.根据小鼠食管切片HE染色统计结果显示,在12月龄,食管癌发生率可达28％,可用于后期研究.结论 成功构建的CP鼠可在正常生长过程中出现食管上皮特异性癌变,将为探索食管癌的生理病理作用机制及免疫微环境对肿瘤的影响提供在体模型.
关键词：食管癌Cre-loxP系统CRISPR/Cas9技术小鼠模型
分类号：R735.1(消化系肿瘤)
资助基金：河南省优秀青年科学基金项目(222300420041)河南省重点研发与推广专项(科技攻关)项目(242102310146)
论文发表日期：2025-12-31
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 241-247,266 )
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