重组T7噬菌体溶菌酶的纯化及其牙龈卟啉单胞菌溶菌活性研究
李研研1
田重庆1
郝雨杭1
左嘉慧1
张一鸣1
陶星宇1
李智涛1
高社干2
1.河南科技大学基础医学与法医学院,河南 洛阳,4710232.河南科技大学第一附属医院,河南 洛阳,471023
摘要：目的 通过基因工程方法获得大肠杆菌(Escherichia coli)T7 双链DNA噬菌体溶菌酶(T7 double-stranded DNA bacteriophage lysozyme,T7-Lys),并验证该酶对大肠杆菌及牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的抗菌活性.方法 根据GenBank中的T7-Lys基因序列,并按大肠杆菌的密码子偏向进行优化,人工合成基因,构建pET-28a(+)/(T7-Lys)原核表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中.优化IPTG诱导浓度和大肠杆菌培养温度,通过SDS-PAGE分析可溶性目的蛋白的表达,确定大肠杆菌的最佳培养和诱导条件,通过亲和层析纯化T7-Lys,并评估不同浓度的T7-Lys对大肠杆菌和Pg的溶菌效果.结果 经双酶切和测序鉴定,成功构建了pET-28a(+)/T7-Lys重组表达质粒.通过Expasy软件的ProtParam工具预测,重组蛋白分子量约为19.15 kDa,亲水性总平均值为-0.565.最佳的IPTG诱导条件为0.5 mmol·L-1的浓度和23℃的温度,最佳诱导时间为24 h.重组T7-Lys主要以可溶形式表达.实验室规模发酵,结果每升发酵液表达纯化后得到约 79.26 mg的T7-Lys蛋白.T7-Lys对大肠杆菌具有溶菌作用,比活为29 081 U·mg-1,对Pg的溶菌作用更加明显,比活达到 35 948 U·mg-1.结论 成功构建pET-28a(+)/T7-Lys重组蛋白表达质粒,并获得可溶性T7-Lys重组蛋白.T7-Lys对大肠杆菌和Pg等革兰氏阴性菌均具有显著的溶菌效果.
关键词：牙龈卟啉单胞菌大肠杆菌重组T7溶菌酶诱导表达亲和层析
分类号：R781.4(口腔内科学)Q814.9(酶工程)
资助基金：河南科技大学大学生科研训练计划资助项目(SRTP;2023362)
论文发表日期：2025-09-25
在线出版日期：2026-09-12（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 182-187 )
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