不同片段的NPM1-EGFP融合表达载体的构建和表达
刘岩
张飞
郭华
张晓方
张宁
1.天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室,天津,3000602.天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室,天津,3000603.天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室,天津,3000604.天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室,天津,3000605.天津医科大学附属肿瘤医院 乳腺癌防治教育部重点实验室 天津市肿瘤防治重点实验室,天津,300060
摘要：目的 构建不同片段的NPM1与绿色荧光蛋白(EGFP)的真核融合表达质粒,检测其在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法 RT-PCR法从人乳腺癌MDA-MB-231细胞cDNA中扩增不同片段的NPM1,产物经电泳分离、切胶纯化后,分别采用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ进行酶切,然后与同样酶切后的pEGFP-C3载体进行连接反应,将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,挑取克隆,提取质粒并酶切鉴定.将酶切及测序鉴定后的pEGFP/NPM1质粒采用脂质体介导后将其转入MDA-MB-231细胞中,通过Western blot技术检测其蛋白的表达.倒置荧光显微镜观察其亚细胞定位.结果 酶切鉴定和基因测序结果显示不同片段的pEGFP-NPM1融合表达质粒构建成功,并可在MDA-MB-231细胞内表达,倒置荧光显微镜下可以清晰显见融合蛋白的亚细胞定位.结论 NPM1及其不同结构域的真核重组质粒构建成功,在细胞中成功表达,并可以用于分析其亚细胞定位,从而为进一步研究NPM1在乳腺癌发生发展中的作用奠定基础.
关键词：乳腺肿瘤NPM1质粒MDA-MB-231细胞定位
分类号：R73-3(肿瘤学实验研究)
资助基金：国家自然科学基金(81001188)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 45-47 )
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