基于CP基因的云南烟草花叶病毒RT-LAMP快速检测体系的构建
赵正婷1
盖晓彤2
张俊蕾3
卢灿华2
姜宁2
刘雅婷4
1.云南农业大学农学与生物技术学院,云南 昆明 6502012.云南省烟草农业科学研究院,云南 昆明 6500213.云南农业大学植物保护学院,云南 昆明 6502014.云南农业大学烟草学院,云南 昆明 650201
摘要：为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了 5 组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引物浓度比等进行逐一优化,建立了云南烟草TMV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系.结果表明,最佳引物组为第 4 组,最适反应温度为 60℃,甜菜碱、dNTPs、Mg2+的最佳反应浓度分别为 0.6、0.4、2.0 mmol/L,最佳内、外引物浓度比为 4∶1,最佳反应时间 40 min.优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可肉眼判断结果,特异性高,灵敏度是常规RT-PCR的 10 倍.RT-LAMP检测体系的建立为云南烟草TMV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法.
关键词：烟草花叶病毒CP基因RT-LAMP特异性灵敏度
分类号：S435.72(病虫害及其防治)
资助基金：国家自然科学基金(32260681)云南省烟草公司科技计划项目(2021530000242031)云南省科技厅基础研究专项(202101AU070129)
论文发表日期：2024-05-28
在线出版日期：2026-05-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 154-162 )
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