靶向大鼠TGF-β1基因shRN A真核表达载体的构建及鉴定
都泓莲
张千
邓存良
1.泸州医学院附属医院感染病科,泸州,6460002.泸州医学院附属医院感染病科,泸州,6460003.泸州医学院附属医院感染病科,泸州,646000
摘要：构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）真核表达载体，为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shR-NA的特异性寡核苷酸片段，另选通用阴性对照序列HK，将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1．1中，构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK，行酶切鉴定及测序分析，并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞，荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实，构建的shRNA成功插入到载体，重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致，3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体，为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。
关键词：肝纤维化TGF-β1RN A干扰质粒基因重组
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：四川省卫生厅项目(110345)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2026-09-11（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 93-97 )
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