Sox2- R9- EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定
殷慧群1
张运海2
刘亚2
曹鸿国2
孙雪萍2
章孝荣2
1.解放军105医院,安徽合肥,2300112.安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥,230036
摘要：构建、表达、纯化、鉴定Sox2- R9 - EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性.以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET- 28a- EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和层析纯化和SDS- PAGE检测表达产物后,将Sox2- R9 - EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞中以观察其转导活性.成功构建Sox2- R9 - EGFP融合蛋白原核表达载体,纯化后蛋白经SDS- PAGE检测证实融合蛋白片段大小正确,加到培养的猪胎儿成纤维细胞中可观察到Sox2-R9-EGFP融合蛋白能进入细胞,且部分可定位于细胞核.获得了Sox2- R9 - EGFP原核蛋白表达栽体,R9能介导Sox2蛋白进入细胞,为进一步利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS细胞)的研究奠定了基础.
关键词：SOX2基因原核表达细胞穿膜肽融合蛋白
分类号：R318.5(医用一般科学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(973-2009CB941004)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2026-09-11（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 143-149 )
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