人Delta-like1蛋白的表达及其对动员外周血CD34+细胞的扩增作用
刘强1
郑瑾2
何飞3
李国辉1
黄斯勇1
郝淼旺1
梁英民1
1.第四军医大学唐都医院血液科,陕西西安,7100322.第四军医大学唐都医院中医科暨中西医结合肿瘤科,西安,7100323.第四军医大学遗传与发育生物学教研室,西安,710032
摘要：构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用.克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性.磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用.结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白.配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路.此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用.我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础.
关键词：Notch信号hDll1原核表达造血干/祖细胞扩增CD34+细胞
分类号：R318(医用一般科学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2006AA02A111)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2026-09-11（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 249-253 )
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