1种检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术构建
贾双荣1
湛晓琴1
邓少丽2
陈鸣2
张娟1
1.重庆市中医院检验科,4000212.陆军军医大学大坪医院检验科,重庆,400042
摘要：目的 构建1种检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术.方法 将多重连接探针扩增(multiplex ligafion-dependent probe amplification,MLPA)技术与实时PCR技术相结合,优化杂交和连接反应条件,建立MLP-RT-PCR反应步骤.设计检测HBV耐药相关基因5个突变位点的4类MLPA探针,根据反应特异性筛选出高特异性探针.同时对5个突变位点进行检测,考察该方法的特异性.检测不同浓度突变株的样本考察该方法的灵敏度.结果 统一优化了各个位点的探针反应条件,提高了检测通量;选择单个错配碱基的MLPA探针,可提高检测特异性,5个突变位点检测之间无交叉反应;该方法的扩增效率可达99％～105％,可检测最低0.1％突变率的样本.结论 成功构建了检测基因点突变的新型MLP-RT-PCR技术,该方法可在1个反应管中同时检测HBV耐药相关基因的5种突变形式,1次检测时间为4～5 h,为临床提供1种能够快速检测HBV耐药相关基因点突变的方法.
关键词：多重连接探针扩增实时PCR乙型肝炎病毒基因点突变
分类号：R446.9(诊断学)
资助基金：重庆市科委前沿与应用基础项目(cstc2015jcyjA10005)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 989-996 )
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