人酪氨酸激酶6原核表达载体的构建、表达、纯化与鉴定
杨学习
谢美娟
李欣
李粉霞
徐伟文
李明
1.南方医科大学生物技术学院,广州,5105152.南方医科大学生物技术学院,广州,5105153.南方医科大学生物技术学院,广州,5105154.南方医科大学生物技术学院,广州,5105155.南方医科大学生物技术学院,广州,5105156.南方医科大学生物技术学院,广州,510515
摘要：目的 构建人络氨酸激酶6(PTK6)与His融合蛋白重组表达载体,在大肠杆菌中诱导表达,并对重组蛋白进行纯化.方法 通过PCR在编码PTK6的cDNA序列两端添加EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点,双酶切后将编码PTK6的cDNA序列亚克隆至原核表达载体PHUE构建重组蛋白表达载体PHUE/PTK.重组载体经鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞.IPTG诱导重组蛋白表达.收集菌体裂解后,用尿素洗涤和溶解包涵体.溶解上清经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化产物.结果 成功构建人PTK6重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为55 000,与预期一致.亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明狭得纯度大于80%的目的 重组蛋白.结论 人PTK6 His融合蛋白的纯化为多克隆及单克隆抗体的制备以及结构和功能的研究奠定了基础.
关键词：酪氨酸激酶6表达载体构建表达纯化
分类号：Q555.7(酶)
资助基金：国家"十一五"高新技术研究发展计划(863)项目(2006AA02A311)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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