摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆、表达及活性鉴定
朱晓艳
朱军民
王竞
黎庶
饶贤才
胡福泉
谭银玲
1.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室2.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室3.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室4.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室5.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室6.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室7.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室
摘要：目的 克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物.方法 以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的 蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性.结果 内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5 mmol/L IPTG在37℃诱导5 h后内溶素重组蛋白可获得最佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用.结论 成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础.
关键词：噬菌体内溶素基因表达纯化
分类号：Q812(生物工程学(生物技术))
资助基金：国家自然科学基金(30770093)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 705-708,712 )
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