大鼠HSPB7蛋白的表达、活性研究及抗体制备
王竞
赵晓军
1.四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所2.四川大学纳米生物医学技术与膜生物学研究所
摘要：目的 克隆SD大鼠热休克蛋白HSPB7基因,通过原核表达、纯化获得HSPB7蛋白,对其活性进行初步研究,并制备其多克隆抗体,为进一步研究HSPB7蛋白奠定基础.方法 从SD大鼠心脏组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到HSPB7基因,亚克隆入pET-43.1a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,获得可溶性表达产物.经纯化、质谱鉴定后进行生物学活性研究,并用纯化蛋白免疫新西兰兔,分离血清,Western blot法测定抗体效价和特异性.结果 原核表达载体pET-43.1a-HSPB7成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量(Mr)约18 600的HSPB7蛋白,纯化蛋白经质谱鉴定正确.HSPB7具有分子伴侣活性,这种活性具有温度依赖性.用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备的多克隆抗体效价达1:16 000,且具有较强免疫特异性.结论 得到具有生物学活性的大鼠HSPB7蛋白,成功制备了兔抗大鼠HSPB7蛋白的多克隆抗体,为后续研究提供了重要的实验材料.
关键词：热休克蛋白HSPB7原核表达抗体制备
分类号：R392-33(医学免疫学)R392.1(医学免疫学)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 596-599 )
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