镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立
唐勇
王建华
向军俭
王宏
邓宁
杨红宇
1.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,5106322.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,5106323.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,5106324.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,5106325.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,5106326.暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,510632
摘要：目的 制备Cd2+单克隆抗体(McAbs,单抗),建立Cd2+ 间接竞争酶免疫学检测方法 (EHSA).方法 利用双功能螯合剂iEDTA将Cd2+分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备免疫抗原和检测抗原.免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗Cd2+的单抗.鉴定单抗的效价、特异性、亚类及亲和力.以该抗体为基础建立检测镉离子的间接竞争ELISA方法 ,分析该方法 的灵敏度、检测限、工作范围.结果 成功制备出Cd-iEDTA-KLH和Cd-iEDTA-BSA偶联物;筛选出一株稳定分泌抗Cd-iEDTA单抗的杂交瘤细胞株C2G5该细胞株分泌的抗体亚类为IgG1,腹水抗体效价为1×106,相对亲和力结合常数Ka为1.6×109 L/mol.特异性结果 显示,除Hg2+外,该抗体与Ph2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Al3+、Ni2+、Ca2+、Cu2+等金属离子的交叉反应低.建立了检测镉离子的间接竞争ELISA方法 ,该方法 的检测限为10 ng/mL,IC50为250 ng/mL.结论 建立了镉离子的竞争ELISA检测方法 ,检测限达到无公害水产品的国家标准(100 ng/g).
关键词：镉离子单克隆抗体竞争ELISA
分类号：R392.3(医学免疫学)
资助基金：广东省科技计划面上项目(2003C20411)国家科技支撑计划项目子项目(2008BAK42B05)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 214-217,221 )
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