米尔比霉素肟化物ScFv噬菌体展示抗体库的构建
张晓
张睛晴
温爽
刘媛
刘贤进
1.江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京,2100142.江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京,2100143.江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京,2100144.江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京,2100145.江苏省农业科学院食品质量安全检测研究所,南京,210014
摘要：目的 构建具16元大环内酯共性结构小分子物质的特异性抗体库.方法 免疫原MIID-BSA免疫小鼠后从脾细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增得到全套抗体重链可变区基因(VH)及轻链可变区基因(VL),SOE-PCR将VH、VL片段拼接扩增得到单链抗体可变区基因片段(scFv).将ScFv基因克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化感受态大肠杆菌,辅助噬菌体超感染得到上清液即为噬菌体抗体库.结果 RT-PCR扩增出长360 bp左右的抗体重链可变区基因(VH)及340 bp左右的轻链可变区基因(VL),SOE-PCR扩增得到750 bp左右的ScFv基因片段,成功构建了库容量为2.4×106,滴度为2.0×1012pfu/mL的噬菌体单链抗体库.结论 构建的抗体库目的片段连接率较高,多样性较好,为下一步16元大环内酯类小分子物质高特异性抗体的筛选奠了基础.
关键词：米尔比霉素肟化物单链可变区抗体噬菌体展示抗体库
分类号：Q523+.3(核酸)
资助基金：国家自然科学基金项目(30471155)农业部"948"项目(2005-Z24)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 688-691 )
英文信息