人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定
刘惠荣1
吴刚2
周冰3
申乐2
薛红2
陈保生2
1.内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室,呼和浩特,0100182.中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室,北京,1000053.北京市药品不良反应监测中心,北京,100024
摘要：目的 利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清.方法 采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆人pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清.用问接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定.结果 SDS-PAGE分析表明,PITP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3 h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1:256 000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合.结论 成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具.
关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(39770168)国家重点基础研究发展计划（973计划）(973;2006 CB 503801)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 684-687 )
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