RGD-FasL基因的构建、表达、纯化及其活性分析
苏金华1
李文珠2
王生育1
黎之静1
陈彩霞3
庄国洪1
1.厦门大学医学院抗癌研究中心,福建厦门,3610052.厦门大学医学院抗癌研究中心,福建厦门,361005;厦门大学生命科学学院,福建厦门,3610053.厦门大学生命科学学院,福建厦门,361005
摘要：目的 构建适于原核表达的重组蛋白RGD-FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析.方法 通过重叠PCR将RGD序列插入到FasL基因的N端,获得RGD-FasL基因,构建pGEX-5x-1/RGD-FasL表达载体.转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,GST柱纯化.采用体外黏附实验、MTT比色法、流式细胞法检测融合蛋白的功能.结果 通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因.目的蛋白以分泌的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后,蛋白纯度达95%以上.体外黏附实验表明所纯化的融合蛋白可与宫颈癌Hela细胞发生特异结合.MTT比色法与流式细胞技术均表明纯化的融合蛋白能特异性地诱导肿瘤细胞发生凋亡.结论 重组蛋白RGD-FasL表达载体的成功构建、表达、纯化及活性分析,为进一步的功能研究奠定了基础.
关键词：RGD-FasL肿瘤靶向治疗凋亡
分类号：R392.33(医学免疫学)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 647-650,655 )
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