TAT-EGFP融合蛋白的表达纯化及穿膜活性的研究
李欢
胡晓梅
陈志瑾
丛延广
黎庶
周莹冰
李明
胡福泉
1.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000382.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000383.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000384.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000385.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000386.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000387.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000388.第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038
摘要：目的 在大肠埃希菌中高效表达TAT-EGFP融合蛋白并鉴定纯化,然后进行穿膜活性的研究.方法 以本室前期构建的重组质粒pQE-EGFP为模板,采用PCR方法特异性扩增TAT-EGFP基因序列,随后克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白质,经Ni2+-金属螯合亲和层析纯化,将纯化蛋白加入体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞中,荧光显微镜下观察TAT蛋白的穿膜活性.结果 成功构建了pQE-TAT-EGFP重组质粒的,转化大肠埃希菌JM109,经WIG诱导,目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE、Westernblotting初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为30 160,纯化得到了目的融合蛋白TAT-EGFP.并在体外培养的B16细胞中证实TAT-EGFP融合蛋白穿透生物膜的能力.结论 通过对TAT-EGFP融合蛋白穿膜活性的分析,证实了TAT具有穿膜活性,为TAT-PEⅢ融合蛋白抑瘤活性的研究提供了理论依据,也为生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用奠定了基础.
关键词：TAT-EGFP融合蛋白表达纯化穿膜活性
分类号：O939.93(数理科学和化学)
资助基金：国家自然科学基金(30572158)重庆市自然科学基金(CSTC-2005BB 5294)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 630-633 )
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