毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化
陈志瑾
丛延广
周莹冰
侯瑞
胡福泉
饶贤才
1.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000382.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000383.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000384.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000385.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,4000386.第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038
摘要：目的 在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法.方法 采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-II过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的 蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析.最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定.结果 在培养至工程菌菌体湿重约200~250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的 蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L.发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的 (体积浓缩约2/3).再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的 产物的纯度达98%以上,得率达32.5%.且纯化的目的 蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性.结论 酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的 蛋白、酵母色素及脱盐的目的 ,为规模化制备hPAB-β创造了前提.
关键词：毕赤酵母肽抗生素hPAB-β发酵纯化
分类号：Q812.3(生物工程学(生物技术))
资助基金：国家科技攻关计划(06G075)重庆市科技攻关计划(CSTC.2005AB5021)国家自然科学基金(30772061)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 332-336 )
英文信息