重组Rab8截短体蛋白的原核表达、纯化和抗体制备
徐小峰1
田衍平2
陈宗涛1
陈炜1
江雯1
刘丽梅1
安静3
1.第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,4000382.第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室,重庆,4000383.首都医科大学基础医学院微生物学教研室,北京,100069
摘要：目的 获得Rab8纯化蛋白,制备多克隆抗体,为深入研究Rab8在病毒感染宿主细胞过程中的作用奠定基础.方法 首先从HepG2细胞中克隆Rab基因,然后从Rab8质粒中亚克隆Rab8 C端编码122个氨基酸的基因片段,构建Rab8与6His的融合蛋白原核表达质粒.原核表达与蛋白纯化后,免疫动物,制备Rab8多克隆抗体.采用ELISA法检测其效价.Western检验抗体特异性,间接免疫荧光染色法验证其免疫组化特性.结果 克隆了人Rab8编码基因,构建了表达Rab8 C端编码122个氨基酸的原核表达质粒pQE31-Rab8-122,经过大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子量约15 000的融合蛋白,免疫Balb/c小鼠后收获抗血清.ELISA显示抗体效价达1/20 000.Western blot和免疫荧光染色结果显示此多克隆抗体能够与原核表达的Rab8蛋白发生特异性反应,并能够识别HepG2细胞中内源性Rab8蛋白.结论 本研究获得原核表达的Rab8纯化蛋白,成功的制备了Rab8多克隆抗体,为进一步研究Rab8参与病毒感染宿主细胞提供了重要的实验材料.
关键词：RabS原核表达抗体制备
分类号：R329.2(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(30471552)国家自然科学基金(30640065)国家自然科学基金(30671853)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 234-237 )
英文信息