CIP29对布鲁氏菌侵袭和巨噬细胞凋亡影响的初步研究
吴小艳
赵忠鹏
张良艳
王希良
1.军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,1000712.军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,1000713.军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,1000714.军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071
摘要：目的 研究CIP29在细胞中的定位及其对巨噬细胞凋亡和布鲁氏菌侵袭的影响.方法 通过RT-PCR方法从细胞中获取CIP29基因片段,并将其亚克隆入质粒载体pET28a和eGFP,构建原核表达质粒pET28a-CIP29和真核表达质粒eGFP-C IP29,原核表达质粒用于制备CIP29抗体,用于后续CIP29蛋白的检测;真核表达质粒用于转染巨噬细胞,通过荧光显微镜、Western blot技术检测CIP29在真核细胞中的表达及定位, Annexin-Ⅴ/PI双染检测其对细胞凋亡的影响,布鲁氏菌侵袭试验检测其对布鲁氏菌入侵巨噬细胞的影响.结果 获得了CIP29基因,构建的表达质粒pET28a-CIP29 和eGFP-CIP29经测序和双酶切鉴定,证实重组表达质粒构建成功.将pET28a-CIP29转化BL 21中,CIP29蛋白得到了表达,制备了特异性抗体,经ELISA检测效价达1∶25 600.进一步构建真核表达质粒eGFP-CIP29,转染细胞后,荧光显微镜观察结果显示其定位于核内,但也有部分扩散之胞质中,CIP29可诱导细胞的凋亡,但对布鲁氏菌侵袭的影响无统计学意义.结论 本研究获得CIP29重组蛋白,并制备了其多克隆抗体,CIP29瞬时高表达诱导巨噬细胞凋亡.
关键词：巨噬细胞CIP29布鲁氏菌凋亡
分类号：R378.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30170853)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 106-110 )
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