Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体蛋白的研究
田代印
符州
王晓芳
王莉佳
1.重庆医科大学附属儿童医院呼吸科,重庆,4000142.重庆医科大学附属儿童医院呼吸科,重庆,4000143.重庆医科大学附属儿童医院呼吸科,重庆,4000144.重庆医科大学附属儿童医院呼吸科,重庆,400014
摘要：目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体 (mIL-4RA)蛋白.方法 PCR方法扩增小鼠IL-4 C118截断型基因,定向克隆入转移质粒pFastBacHTB中,转化感受态DH10Bac细胞,在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座.筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染sf9昆虫细胞株,获取完整重组杆状病毒.反复感染sf9细胞,扩增病毒同时表达目的 蛋白;用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量.结果 经核苷酸序列测定及PCR方法,鉴定成功获得含mIL-4RA基因的重组杆粒;通过杆粒转染后sf9细胞所表现出来的细胞病变,推断成功转染并获得重组杆状病毒;最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为(1.15±0.12) ng/mL.结论 本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础,同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考.
关键词：白细胞介素4受体拮抗体杆状病毒真核表达
分类号：Q344+.13(遗传学分支学科)
资助基金：国家自然科学基金(30271380)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 79-82 )
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