人B-CAM/Lu基因逆转录病毒载体的构建及其在L929细胞中的表达
陈琦1
曹慧2
高哓飞2
张海燕2
王芬2
李厚达2
1.扬州大学医学院生理教研室,江苏,扬州,225001;扬州大学医学院实验动物中心,江苏,扬州,2250012.扬州大学医学院实验动物中心,江苏,扬州,225001
摘要：目的 克隆人B-CAM/Lu基因,构建其逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu的L929细胞株.方法 RT-PCR技术克隆人B-CAM/Lu基因,并插入逆转录病毒载体pEGZ中,该重组逆转录病毒载体与pH456、pH460两个辅助病毒载体一起,共转染包装细胞293T,并感染L929细胞,经Zeocin筛选获得的细胞株通过RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光鉴定细胞中B-CAM/Lu基因mRNA的转录和蛋白表达.结果 成功获得人B-CAM/Lu基因,测序正确,亚克隆至逆转录病毒载体pEGZ后,经转染筛选,获得的抗性L929细胞株通过RT-PCR和Western blot分析,检测到B-CAM/Lu mRNA的转录和目的 蛋白的表达,通过间接免疫荧光确定该蛋白定位表达在L929转基因细胞膜上.结论 成功克隆并构建了人B-CAM/Lu基因的重组逆转录病毒表达载体,获得稳定高表达B-CAM/Lu蛋白的L929细胞株,为将其作为免疫源,制备B-CAM/Lu单抗用于镰刀型红细胞病及一些肿瘤疾病的检测诊断打下了基础.
关键词：B-CAM/LuL929表达逆转录病毒载体
分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：科技型中小企业技术创新基金(04C26223200112)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 445-448 )
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