链重叠PCR构建抗HIV免疫毒素及其表达与鉴定
金洪涛1
金宁一2
李臻1
李昌2
付延军2
王宏3
1.吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062;解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室,长春,1300622.解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室,长春,1300623.暨南大学生命科学技术学院,广州,510632
摘要：目的 提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性. 方法 利用链重叠PCR融合的方法,构建了免疫毒素DT-ScFv,二者之间添加了connector序列,免疫毒素基因PCR连接测序以后,将其克隆入pET28a质粒,在BL21(DE3)工程菌中诱导表达,通过免疫印迹鉴定表达的重组蛋白,并通过与表达HIV-1 gp120的靶细胞的间接免疫荧光实验,验证免疫毒素的细胞识别结合能力.结果 本研究成功地构建了免疫毒素DT-ScFv,经原核表达证明目的蛋白以部分可溶的形式存在于表达菌中,添加的connector序列有助于DT-ScFv在细胞中获得正确折叠,重组免疫毒素能与表达gp120的细胞发生特异性的识别结合.结论 利用链重叠PCR融合的方法,添加connector序列,有助于提高免疫毒素表达的可溶性与生物活性.本研究对抗HIV免疫毒素的活性研究与应用研究具有重要的意义.
关键词：免疫毒素链重叠PCR原核表达
分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家科技攻关计划(06G127)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 94-96 )
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