小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建及制备
陈吉泉
修清玉
刘涛
何皓(頔)
颜泽敏
1.第二军医大学长征医院呼吸内科,上海2000032.第二军医大学长征医院呼吸内科,上海2000033.第二军医大学长征医院呼吸内科,上海2000034.第二军医大学长征医院呼吸内科,上海2000035.第二军医大学长征医院呼吸内科,上海200003
摘要：目的 构建小鼠T-bet基因重组腺病毒.方法 采用RT-PCR方法从小鼠脾脏活化的T淋巴细胞中扩增的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒,酶切线性化后,与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-l以电穿孔的方法共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组,经酶切鉴定筛选正确重组子,以线性化重组质粒转染293细胞,制备重组腺病毒小鼠T-bet重组腺病毒AdT-bet,最后以PCR及Western blot方法鉴定T-bet的表达.结果 感受态大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组24 h后共获得35%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一个30 kb的大片段和一个4.5 kb的小片断.该质粒转染293细胞后获得的重组腺病毒可高效表达T-bet,纯化后病毒滴度为2.0×1011 PFU/mL.结论 应用细菌内同源重组法成功快捷构建了含小鼠T-bet基因的重组腺病毒,所获得的AdT-bet可进一步应用支气管哮喘等疾病的基因治疗研究.
关键词：T-betAdEasy系统基因治疗腺病毒载体
分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30200116)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 84-87 )
英文信息