幽门螺杆菌分子内佐剂三价疫苗的构建、纯化及活性研究
高原
张卫军
邹全明
1.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的 构建幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白基因napA、黏附素hpaA、尿素酶B亚单位活性功能片段ureB414与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)的分子内佐剂三价融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础.方法 利用分子克隆技术构建携带napA-hpaA-ureB414-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-NHUL,转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用HK 26/60 Superdex-75分子筛和亲和层析柱Chelating Sepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Western blot鉴定,GM1-ELISA检测rNHUL与神经节苷脂的结合.口服免疫Balb/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性.结果 重叠延伸PCR扩增出了约1 590 bp的NHUL融合基因;其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致.重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的25%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的Mr约59 000,纯化后纯度大于90%.Western blot检测其具有良好的抗原性.该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性.动物实验表明,多亚单位疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG、IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于单一亚单位疫苗.结论 所获得重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础.
关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位疫苗分子内佐剂
分类号：R392-33(医学免疫学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2003AA215020)国家科技重大专项(2003AA2Z3C64)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 690-693,697 )
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