小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β和Ret蛋白融合基因的克隆、表达与纯化
欧雪玲1
杜军2
何玉文2
曾军2
伍新尧1
1.中山大学,基础医学院法医物证教研室,广州,5100802.中山大学,药学院分子生物学实验室,广州,510080
摘要：目的 构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β(murine macrophage inflammatory protein 1β,mMIP-1β)与原癌基因RET的融合基因并构建融合基因mMIP-RET的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达.方法 用RT-PCR方法分别扩增mMIP1β和RET的基因片段,利用分子克隆的方法 将这两个片段用铰链GGIPG连接,并克隆到表达载体pET22b中.双酶切且测序正确后转化大肠杆菌BL21,构建表达pET22b mMIP1β-RET/His融合蛋白的菌株.经IPTG诱导表达后,ProBond Resin进行亲和层析纯化,然后纯化产物进行复性及超滤浓缩.结果 成功克隆mMIP1β和RET基因片段;成功地构建了pET22b mMIP1β-RET/His融合蛋白原核表达载体,在大肠杆菌中获得表达,并对表达产物进行了纯化,和Western blot鉴定.结论 成功制备高纯度mMIP1β-Ret/His融合蛋白,为进一步研究修饰的肿瘤抗原的生物学功能奠定了基础.
关键词：基因克隆融合蛋白表达纯化
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30471978)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 566-569 )
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