两种β2m重组质粒的构建及其表达与纯化
郭薇1
张建琼2
沈传来2
孟凡岩2
1.中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室,南京,210009;东南大学遗传学研究中心,南京,2100092.东南大学遗传学研究中心,南京,210009
摘要：目的获得大量有活性的人β2m重组蛋白,为构建HLA与抗原肽的复合体及HLA四聚体作准备.方法采用RT-PCR克隆法构建重组质粒,于BL21(DE3)菌中原核表达后,经金属螯合亲和层析纯化,BCA Protein Assay Kit测定蛋白含量,应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况及Western blot分析重组抗原的活性.结果成功地构建了两种融合表达载体PET-22b/β2m及PET-28a/β2m,两者的表达量分别为5～10 mg/L,40～80 mg/L,纯度均为95%.结论通过比较,确定了β2m最佳表达载体系统及表达条件,为研究轻链在原核系统中表达、纯化以及构建HLA复合体,探讨免疫识别机制奠定了基础.
关键词：克隆β2m基因表达纯化
分类号：R349(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 460-462,465 )
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