金黄色葡萄球菌肠毒素B的基因克隆与表达
宋云扬
王惠芳
李艳军
高川
张靖
张金平
吴方晖
1.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022052.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022053.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022054.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022055.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022056.总装备部防化研究院第四研究所,北京,1022057.总装备部防化研究院第四研究所,北京,102205
摘要：目的克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,表达并纯化基因重组SEB,并对其进行活性研究.方法采用PCR技术从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增得到SEB基因,克隆到原核表达载体pET22b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,全自动测序仪测序.IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,用HiTrapTM chelating HP柱纯化重组表达的SEB,通过ELISA实验检验重组SEB的抗原性.用脂多糖和放线菌素D致敏小鼠模型检测重组SEB的毒性.结果所克隆的SEB基因核苷酸序列与报道的序列完全相同.表达的SEB在SDS-PAGE图谱的位置与预期相符,得到了SDS-PAGE电泳纯的基因重组SEB.ELISA试验结果表明,纯化的重组SEB与抗野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应.小鼠致死性试验表明,重组SEB与野生型SEB具有相同的毒性.结论在大肠杆菌中成功克隆及表达了金黄色葡萄球菌肠毒素B,为进一步分析SEB分子中相关活性位点及研究SEB发病机制打下了基础.
关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B克隆多聚酶链试反应原核表达
分类号：R378.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 337-340 )
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