抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定
何峰容1
王晓娟2
周小欧3
李曼君3
朱慧芬3
吴万敏2
沈关心3
1.湖北省新华医院检验科,武汉,430015;华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系,武汉,4300302.内蒙古医学院第一附属院普通外科,呼和浩特,0100503.华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系,武汉,430030
摘要：目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础.方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(Ald).通过4轮"吸附-洗涤-扩增",从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性.结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLASF数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值.结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础.
关键词：SARS噬菌体抗体库技术独特型抗体(AId)单链抗体(ScFv)
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：内蒙古卫生厅项目(20035028)湖北省武汉市科技局科研项目(20036101002-01)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 224-226 )
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