人mBAFF在原核系统的可溶性表达及功能鉴定
张立
何凤田
高会广
李蓉芬
彭家和
陈麟凤
黄刚
胡大强
1.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000382.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000383.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000384.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000385.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000386.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000387.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000388.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038
摘要：目的利用含重组质粒pQE80L-mBAFF的DH5α大肠杆菌,优化表达B细胞活化因子的突变蛋白(mBAFF).方法研究mBAFF的体外诱导条件,包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度对表达量的影响.对表达条件进行优化后进行大量表达,经Ni2+NTA亲和层析和SepharcryL S200凝胶过滤层析纯化.流式检测突变蛋白与细胞结合的能力以及MTT检测突变蛋白的生物学活性.结果最佳表达条件是诱导时间4 h,诱导温度37℃,IPTG终浓度0.2 mmol/L.mBAFF占菌体总蛋白的35%,蛋白纯度达98%以上,所获突变蛋白能与淋巴细胞表面受体结合,但不能刺激淋巴细胞增殖.结论优化可溶性表达后能提高mBAFF蛋白质在DH5α大肠杆菌表达,并经Ni+NTA亲和层析和SepharcrylS200凝胶过滤层析得到纯度高的表达产物,所获结果为进一步研究创造了条件.
关键词：B细胞活化因子突变蛋白优化表达纯化
分类号：R730.3(一般性问题)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30400187)中国科学院项目（非规范项目）(30370319)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 217-220 )
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