粉尘螨Ⅱ类变应原的克隆表达、纯化及其免疫学特性
朱健琦
刘志刚
高波
吉坤美
邢苗
1.深圳大学2.3.深圳大学
摘要：目的获得大量具有良好的IgE结合活性的DerfⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究.方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18).经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Derf2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性.结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段.序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同.使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签.表达质粒在E.coli BL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性.结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展DerfⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础.
关键词：粉尘螨变应原表达纯化
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家科技攻关计划(2002AA214011)中国科学院项目（非规范项目）(30471505,30271226)广东省科技厅科技项目(2003A3080502)深圳市科技计划(200218)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 213-216 )
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