针对单克隆抗体MGb1的重组抗独特型抗体的筛选与鉴定
郑英如1
李蓉芬2
李力3
黄刚2
张立2
胡大强2
1.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038;第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科,重庆,4000422.第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000383.第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科,重庆,400042
摘要：目的利用噬菌体呈现技术筛选针对抗胃癌单克隆抗体(简称单抗)MGb1的重组抗独特型抗体(抗-Id),为研制胃癌重组抗-Id瘤苗提供候选分子.方法以单克隆抗体MGb1免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA.RT-PCR分别扩增抗体VL和VHcDNA,经linker DNA连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv文库.以单抗MGb1对文库进行4轮淘选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆,进而经竞争ELISA对其所属抗-Id类型进行初步鉴定.结果VL和VHcDNA分别约为320和340bp,ScFv DNA约为750bp.抗体ScFv文库经四轮淘选后,在随机筛检的50个克隆中得到18个呈现抗-Id ScFv的噬菌体单克隆.在18个克隆中,有4个呈现β或γ型抗-Id ScFv.结论经重组噬菌体抗体技术成功地筛选到了针对单抗MGb1的噬菌体呈现型抗-IdScFv,从而为进一步获得能诱导抗胃癌免疫的抗-Id ScFv奠定了基础.
关键词：胃癌抗独特型抗体噬菌体呈现技术肿瘤疫苗
分类号：R735.203(消化系肿瘤)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30200338)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 86-89 )
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